天冬酰胺酶基因的克隆与表达开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.1本课题的意义

l-天冬酰胺酶具有显著地抗肿瘤作用，成为目前用于治疗急性淋巴细胞白血病（all）的主要药物，它也可以用来减少油炸或烘烤食品中丙烯酰胺的形成。在充分了解l-天冬酰胺酶的来源、结构、修饰及重组等方面的研究进展之后，运用一些基因工程的手段，高效表达出活性高的重组l-天冬酰胺酶，使其在医疗和食品等行业得到广泛的应用。

1.2国内外研究概况

2. 研究的基本内容和问题

2.1研究的目标

运用基因工程的手段构建能够高效表达l-天冬酰胺酶的工程菌，并且将产生的粗酶纯化，然后将l-天冬酰胺酶纯酶应用于食品中，以达到控制食品中丙烯酰胺含量的效果。

2.2 研究的内容

3. 研究的方法与方案

3.1研究方法

pcr扩增从产l-天冬酰胺酶的菌体中提取出的目的基因，构建基因工程菌，用lb培养基在适宜的条件下对其进行培养，对发酵液进行离心，超声破壁得到粗酶，再对其用镍柱进行纯化，得到较纯的酶，将所得的粗酶液、纯化后酶液进行sds-page电泳分析，最后对重组l-天冬酰胺酶进行一系列酶学性质的研究。

3.2技术路线

提取基因组pcr-- 目的片段-- 胶回收--t载连接--转化--提质粒--酶切--表达载体连接--转化--工程菌--表达--酶活力测定--酶的纯化--酶学性质的研究

4. 研究创新点

本实验构建了L-天冬酰胺酶基因工程菌，并通过优化表达条件，使酶的表达量提高了很多。将L-天冬酰胺酶应用于食品中，可以从根源上抑制丙烯酰胺的生成，而且操作简单易行，丙烯酰胺降低幅度大，对生产工艺，产品外观，风味口味以及营养等方面没有改变，是一种值得推广的用于控制食品中丙烯酰胺含量的有效方法。

5. 研究计划与进展

5.1研究计划

2014.11.-2014.12. 阅读相关文献，拟定实验方案。获取实验相关材料及仪

器的准备过程