1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
α-低聚半乳糖是一类含有α-半乳糖苷键的功能性低聚糖,广泛分布于天然植物中。
由于人体内缺乏能消化α-低聚半乳糖的α-半乳糖苷酶,它不被人体消化水解,进入大肠内能够有效的促进人类内双歧杆菌的增殖,带来一系列优良的生理功能。
目前已知其具有以下的生理功能:1、促进双歧杆菌增殖,改善肠道内菌群结构双歧杆菌是人体肠道内的益生菌种,能将糖类分解为乙酸、乳酸及一些抗菌素类物质,从而抑制有害菌的生长。
2. 研究的基本内容和问题
本研究拟通过α-半乳糖苷酶,以半乳糖为底物催化合成α-低聚半乳糖,具体研究内容如下:首先以半乳糖为底物,通过α-半乳糖苷酶(α-galactosidase)催化合成α-低聚半乳糖(α-gos);其次通过高效液相色谱(hplc)分析产物的组分,根据已有的低聚糖标样,确定反应产物的组成,其中未知产物拟通过层析柱进行分离纯化,得到单一的组分,再进一步通过质谱、核磁共振等手段进行结构确定,确定未知产物的结构;目前对于低聚半乳糖的鉴定大多采用氨基柱进行分离结合示差检测器检测,但是这种方法的分离效果较差,检测灵敏度不高。
有研究表明[3]采用pmp衍生化的方法能够高效高分辨的分析糖组成。
利用的是柱前衍生化hplc紫外检测法。
3. 研究的方法与方案
1、 对硝基苯酚标准曲线的制作分别取0.1 ml,0.2 ml0.9 ml的10 mmol/l对硝基苯酚(pnp)标准储备液,并用醋酸-醋酸钠缓冲液(ph5.5)配制成浓度为0.01 mmol/l, 0.02 mmol/l 0.09 mmol/l的pnp标准溶液。
分别加各个浓度的pnp标准溶液1 ml到试管中,再加入1 ml醋酸-醋酸钠缓冲液(ph5.5),37℃保温10 min后加入8 ml 0.5mol/l的碳酸钠溶液。
将溶液在405 nm处比色,以pnp溶液浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
4. 研究创新点
本研究以半乳糖为底物,α-低聚半乳糖苷酶来催化合成反应,通过hplc法检测各种反应产物。
为了进一步提高产物的产率,我们分别对影响α-低聚半乳糖合成的各个因素的水平(即温度、ph、底物浓度、供受体比率、酶用量)进行了优化。
但是对含量低的生物来源的样品来说,在分离、纯化糖缀合物中释放的寡糖链时,要求对糖链具有高灵敏度的检测。
5. 研究计划与进展
2013年10月-2013年12月,阅读相关文献,完成文献综述和开题报告2013年12月中旬-2014 年2月,完成预实验,摸索实验条件2014年3月-2014年4月,完成各项实验2014年4月-2014年5月底,整理数据,完成论文
