猪圆环病毒3型分子检测及流行病学调查开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

猪圆环病毒属于圆环病毒科 (circoviridae) 圆环病毒属，为无囊膜的单股负链环状dna病毒，长1759-1768 bp，是目前为止发现的最小的动物病毒。

1974年，德国学者tischer等在多株连续传代的pk15细胞系中首次发现了pcv1[1]，pcv1无致病性，但可在猪群内广泛存在。

1996年，clark从断奶仔猪多系统衰竭综合征（pmws）病死猪病料中分离出另一种猪圆环病毒pcv2[2]，患猪常有精神萎靡、食欲不振、呼吸困难、拉稀、肌肉无力、眼睑水肿、黄疸、贫血、消瘦、生长迟缓等症状。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：1、将pcv3 lamp检测结果与传统pcr结果进行统计与分析，研究其敏感性、准确性和临床应用的可能性；2、进行pcv3在江苏、浙江、河南等不同地区的流行病学调查，加深对pcv3的认识，以便采取相应的防治措施。

研究内容：1、病料的采集和处理；2、病毒dna的提取；3、分别用pcr、lamp方法检测pcv3 dna，并进行符合率分析；4、对检测结果进行流行病学分析，研究pcv3的空间分布和时间分布情况。

拟解决的关键问题：1、pcv3 lamp检测的符合率与临床实用性；2、新发猪圆环病毒pcv3的流行情况与分布规律。

3. 研究的方法与方案

研究方法与实验方案：1、病料的采集和处理方法：在洁净的解剖台上按操作要求对病死猪进行解剖，每头病死猪之间所用器具不混用，解剖病死猪时应避免肠管和胃的污染，不让其内容物流入胸腔或腹腔。

用消毒好的剪刀和镊子取1g脾脏、肺脏以及淋巴结样品，将其剪碎，加入5倍体积的pbs缓冲液，研磨成匀浆，-20℃反复冻融3次。

取1ml浆液，12000rpm 4℃离心10min，除去组织碎片。

4. 研究创新点

1、使用LAMP方法对PCV3临床病料进行检测，与常规PCR相比特异性强，检测时间短，结果直观，具有较高的灵敏性；2、本研究采集2015年-2017年江苏、浙江、河南等不同地区多个规模化养猪场的病料样品，通过PCR、LAMP方法进行鉴定，并对检测数据进行统计学分析，了解3年来猪圆环病毒3型的感染情况和不同地区、不同月份、不同日龄的猪群流行规律，加深了对新发猪圆环病毒的认识，为该病的有效防控提供科学依据。

5. 研究计划与进展

2017年9月～2017年10月 查阅文献资料，对课题进行初步了解；2017年11月～2017年11月熟悉实验室环境，学习必要的操作技能；2017年12月～2018年3月 提取病毒DNA，进行LAMP和PCR检测；2018年3月～2018年4月统计、分析检测结果，进行流行病学调查。