两种肿瘤相关抗原的体外表达及纯化开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

肺癌致死率在肿瘤疾病中居首位。在美国，每年有220，000新发病例，而5年存活率仅仅16%^[1]。近年来在我国，肺癌的发病率和死亡率呈逐年上升趋势。按组织学分类，肺癌可以分为小细胞肺癌（small cell lung cancer，sclc）和非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，nsclc）。nsclc 占肺癌总发病率的80%，包括（鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌）。非小细胞肺癌分为四期，三期非小细胞肺癌有强烈的异质性。由于肺部血液循环丰富，代谢物质交换频繁，肺癌的分泌物或肿瘤脱落物容易进入循环系统，可以从血清里检测。但目前缺乏可靠的血清标志物来鉴别不同组织学类型以及不同分期的nsclc。

血清标志物主要包括两种：抗原（蛋白）和自身免疫抗体。近年来，肿瘤自身抗体因其特异性、稳定性和易检性而越来越受到关注，其对肿瘤的诊断、预后判断、组织分型等的指示意义也在逐步被挖掘。虽然许多肿瘤相关抗原（如p53，c-myc）的自身免疫抗体已被证实，而且在肺癌、乳腺癌等多种实体瘤病人的血清中确有存在，但是单个抗体阳性率较低，通常在10%-30%，故需要一组针对不同特征肿瘤相关抗原的自身抗体以提高诊断的灵敏度。我们实验室曾经选择了72个cta（cancer/testisantigens，肿瘤睾丸抗原）和6个非cta蛋白点制低密度芯片检测nsclc相关的自身免疫抗体，发现ny-eso-1、xage-1、adam29、magec1和p53自身抗体的单个阳性率只在7%-13%之间，而联合检测的阳性率可达到33%，特异性96%^[2]。

为了进一步提高nsclc的检测灵敏度，我们将在上述5个自身抗体靶标的基础上，通过文献检索，新增两个候选靶标，通过蛋白质芯片的技术进行进一步的筛选和验证。优化的靶标组合将可能用于nsclc的临床诊断。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标

构建多个非小细胞肺癌自身抗体标志物的重组质粒，表达cta目的蛋白，构建由cta组成的低密度抗原蛋白芯片进行非小细胞肺癌的辅助诊断。建立新的高特异性和敏感性的蛋白质标记物组合用于诊断非小细胞肺癌。以期将蛋白芯片检测技术用于临床诊断。

研究内容

3. 研究的方法与方案

研究方法

1. 靶标确定

肿瘤的自身免疫抗体是一类针对肿瘤细胞产生的突变、非正常修饰、过度表达或者异常定位蛋白质的自身免疫反应的产物。这些异常的蛋白可能由于分泌或肿瘤细胞坏死或脱落而进入血液循环系统。因此，除了已报道的肺癌自身抗体，我们还将筛选文献报道的肺癌相关的抗原。

2．蛋白表达纯化

4. 研究创新点

特色或创新之处

1.本项目所涉及的实验技术几乎涵盖了本科期间所学专业知识（分子生物学，生物化学，微生物学等），并且运用到今后读研需重点掌握的质谱技术，是一次全方位的科研训练。

2.本项目将分子克隆技术与抗原芯片的构建相结合，用于临床诊断，应用性强。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展

2013年2月25日-2月28日：查阅文献确定新增候选靶标

2014年3月1日4月20日：表达体系的构建

2014年4月21日-5月10日：目的蛋白的表达、纯化、验证以及浓度测定