土壤微生物来源的庆大霉素耐药基因的异源表达开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1928年青霉素的发现,开辟了抗生素化疗的新时代,随后,各种抗生素的研制、开发与利用迅速发展,从此,抗生素在许多疾病的治疗中占有举足轻重的地位在众多抗生素中,以庆大霉素为代表的氨基糖苷类抗生素由于其抗菌谱广、抗菌活性强而被广泛用于临床。

庆大霉素是由绛红小单孢菌棘孢小单孢菌等发酵产生的一种杀菌力较强的广谱抗菌素,目前被广泛用于临床,因此,庆大霉素的相关研究一直是国内外众多学者研究的热点。

但由于其广泛大量的使用，许多的病菌都对它产生耐药性，使得它的药效大打折扣，无法继续作为抗生素类药物使用。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标通过对庆大霉素耐药基因的异源表达蛋白的研究，来发掘新型的庆大霉素耐药机制，从而提高庆大霉素的抗菌活性，延长庆大霉素的使用寿命。

内容完成对土壤微生物中庆大霉素耐药基因基因的异源表达，并探究其抑菌机制。

拟解决的关键问题基因表达载体的构建。

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析实验原理携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌bl21中，在37℃，iptg诱导下，表达携带有庆大霉素耐药基因，蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。

实验材料大肠杆菌bl21试剂/试剂盒 lb液体培养基 庆大霉素 washing buffer elution buffer iptg 蒸馏水 胰蛋白胨 酵母粉 氯化钠仪器/耗材摇床 离心机 层析柱 离心管 移液枪 枪头盒 烧杯 玻璃棒实验步骤一、试剂准备 1.lb液体培养基：胰蛋白胨10g， 酵母粉5g，氯化钠10g，用蒸馏水配至1000ml高压蒸汽灭菌备用。

2.庆大霉素：100 mg/ml。

4. 研究创新点

本实验从耐药基因的异源表达蛋白的角度探究庆大霉素的耐药机制，从而进一步的延缓庆大霉素的使用寿命，在目前的研究还在起步阶段。

5. 研究计划与进展

2017年9月-2017年12月 相关文献的查询，确定课题方向，并完成文献综述2017年12月-2018年1月 基因筛选2018年2月-4月 完成目的基因的蛋白表达纯化，及SDS-PAGE分析2018年5月数据整理，论文撰写提交等