宏基因组文库中耐药阳性克隆的筛选开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

抗生素在作为一类药物应用于人类医疗的同时，还被作为一种动物的饲料添加剂广泛应用于动植物养殖中。

微生物的抗生素耐药性是指微生物能在一定浓度下的抗生素中生长和繁殖。

这是因为其具有抗生素耐药性基因。

2. 研究的基本内容和问题

筛选出宏基因组文库中疑似耐药阳性菌，并且通过培养阳性克隆进一步确定其耐药性。

得到阳性克隆后，培养得到亚克隆，提取质粒，部分酶切后截取一定大小的片段与载体连接，导入感受态大肠杆菌中，并在有一定浓度抗生素的条件下培养大肠杆菌，确定筛选得到了具有抗生素耐药性的菌。

3. 研究的方法与方案

1.24孔板对文库菌进行初筛2.挑选疑似阳性菌，并用文库菌保二代菌。

3.将二代菌接种在含有抗生素的lb培养基上，挑取阳性克隆并摇菌。

4.提取阳性克隆质粒，部分酶切后与载体连接并导入感受态大肠杆菌，培养。

4. 研究创新点

1.利用宏基因组学功能筛选的策略，筛选克隆新型耐药基因，为未来发掘新型耐药机制提供了理论及技术支持。

2.环境微生物宏基因组文库的建立，将会对未来其他功能基因的发掘以及分析提供必要的平台。

5. 研究计划与进展

计划筛选克隆云南文库菌中包含的新型耐药性基因，并对其进行测序，与已知的耐药基因进行序列比对，而后用MIC法测得最小抑菌浓度。