鸡肌肉组织N-糖组分离提取方法研究开题报告

 2022-01-29 18:49:57

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1.1意义聚糖作为第三类生物信息大分子,对于维持多细胞动物个体十分重要。

因此,20世纪末由几个糖生物学家同时提出了糖组的概念。

糖组指单个个体的全部聚糖,累死基因组学和蛋白质组学。

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2. 研究的基本内容和问题

2.1研究目标:设计出合适的糖链释放方法并成功分离出N-糖链2.2研究内容:采用酶法获得N寡糖寡糖链荧光衍生化反应分离糖链的方法的优化2.3关键问题:如何提取寡糖链除去多余的衍生化试剂

3. 研究的方法与方案

3.1研究方法从鸡肉中提取出糖蛋白,纯化后得到糖链,经酶解、标记,并过uhplc分离糖链技术路线采样去脂胃蛋白酶消化过阳离子交换柱过g25柱pngase f酶消化过c柱2-ab标记过uhplc3.2实验方案3.2.1样品的制备取新鲜鸡肉、鸡肝、鸡肾和鸡心适量加等量的冰匀浆,之后90℃水浴加热30min。

分别取3g样品加入3ml水以及5.25ml甲醇,超声15min后,加入9.75ml氯仿,再超声15min,15000g离心15min,弃上清并加入等体积的甲醇/水溶液(1/1,v/v),超声15min,15000g离心15min,弃上清并重复上述步骤一次。

弃上清并加入与其相同体积的甲醇,超声15min,15000g离心15min,弃上清,该步骤重复3次。

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4. 研究创新点

与HPLC相比,UHPLC具有更快的分析速度、更好的分离度和更高的灵敏度。

本课题采用UHPLC对来源于鸡肉(或肝、肾、心)糖蛋白糖链的分离,将进一步拓展UHPLC在糖链分离分析方面的应用,为后续糖链结构研究和糖链生物学功能的研究,以及其它动物源糖蛋白的分析提供参考。

5. 研究计划与进展

计划:3月份 阅读相关文献,设计实验方案,准备实验所需材料和试剂4月份 样品制备、糖链释放、荧光衍生、UHPLC5月份 优化实验方案,撰写论文预期进展:设计出合适的糖链释放方法成功分离出N-糖链设计一种借助UHPLC提取和分析动物源糖蛋白糖链的分析方法

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