1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
为抵御病原菌的侵染，植物体已经进化出一套复杂的免疫机制[1]，其中第一种类型的抗病机制是病原菌相关分子模式 pamps，比如鞭毛蛋白、脂多糖类、糖蛋白等，能够被植物体细胞膜上的模式识别受体（prrs）识别，从而激活下游的防卫反应，这种防卫机制被称为 pamps 激活免疫（pti）[2]。另一种机制则是利用植物体内产生的一些抗性蛋白，能够识别病原菌特殊的效应因子，从而诱导受体激活的免疫（eti）。
侵染位点激活的pti 或者eti 能够诱导植物产生广谱抗性，抵抗病原菌的侵染[3]，这也就是所谓的获得性系统抗性（sar）。sar 往往伴随着水杨酸水平的提高与防卫相关基因的表达水平上调，并产生长距离的信号转导，诱导植物非侵染部位对病原的抗性[4]。植物系统抗性也能够被一些有益微生物所诱导，也就是所谓的诱导系统抗性（isr）。一般情况下，isr 一般不依赖水杨酸信号通路，没有pr 蛋白的积累。比如一些荧光假单胞菌，在水杨酸不积累突变体拟南芥nahg 上，仍能诱导植物产生系统抗性。另外也有一些isr 主要通过水杨酸信号通路，如kachroo and robin 报道，铜绿假单胞菌7nsk2 能够诱导大豆以及番茄产生系统抗性，但是在水杨酸不积累转基因植株nahg 番茄中，诱导抗性的能力就消失了[5]。此外，据前期研究表明，蜡质芽孢杆菌ar156 能够诱导拟南芥产生系统抗性；蜡质芽孢杆菌ar156 处理能够激活防卫相关基因pr1、pr2、pr5以及pdf1.2 的表达。以上结果表明蜡质芽孢杆菌ar156 能够同时激活水杨酸以及乙烯茉莉酸两条信号通路。
植物内源small rnas是一类大小在 18-25nt 的非编码的单链 rna分子，主要作用于转录水平或者转录后调控，从而影响基因的表达。植物内源的small rnas介导的基因沉默主要是通过mrna 的切割/降解进行转录后水平的调控，或者通过dna的甲基化或者染色体的修饰等手段进行转录水平的调控[6]。small rnas目前可以分成两大类：micrornas和sirnas。micrornas是由具有发卡结构的前体经过 dcl剪切加工而成。而 sirnas主要是由长的双链rnas剪切加工而成，通常需要rna-依赖的rna聚合酶（rdrps or rdrs）和植物特有的核糖核酸rna聚合酶（pol）iv或v[7]。small rnas的作用方式主要是形成riscs复合物，以此调控mrna的降解、抑制mrna的翻译、调节dna或组蛋白甲基化（导致转录沉默），并能稳定异染色体的功能。
2. 研究的基本内容和问题
1. 工作假说
——蜡质芽孢杆菌ar156通过下调拟南芥内mir472来提高植株内部分r基因的表达，从而增强植株对丁香假单胞菌dc3000的抗性。
—2. 研究内容
3. 研究的方法与方案
（1）转基因植物的构建
——以拟南芥cdna为模版，进行mir472前体编码基因的克隆，插入到gateway 系列表达载体peg100。所有的构建好的载体，利用电转化方法，导入根癌农杆菌（agrobacterium tumefaciens）gv3101，并利用农杆菌介导的转基因方法，通过拟南芥蘸花法进行转基因植株的构建。
（2）蜡质芽孢杆菌ar156诱导拟南芥对pstdc3000抗病性的表型测定
4. 研究创新点
本研究以蜡质芽孢杆菌AR156-丁香假单胞菌DC3000-拟南芥互作模式为研究对象，旨在探究miR472在蜡质芽孢杆菌AR156诱导植物系统抗病性过程中的作用，为生防菌诱导植物系统抗病性、防治多种植物病害提供理论基础，也为未来生防菌的筛选工作提供新思路。
5. 研究计划与进展
2018 年8 月-2019 年4月：
（1）克隆靶标基因，构建携带 mir472 靶标基因植物表达载体的根癌农杆菌 gv3101。
（2）烟草瞬时表达，蛋白水平上验证 mir472 对靶标基因的调控作用。
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