沙门氏菌生物菌膜及其特征性sRNAs开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1研究意义

沙门氏菌(salmonella)是肠杆菌科一属，为革兰氏阴性、无芽孢和荚膜、有鞭毛的兼性厌氧菌，是一类在全球范围内广泛传播的重要人畜共患致病菌。沙门氏菌可通过食物链在人畜间传播，从而造成严重的公共卫生问题。其传播源头主要是被污染的蛋类、肉类、环境、症状不明显的携带者以及处于恢复期的患者。调查结果显示，沙门氏菌在肉类产品的生产和流通中污染严重，对消费者造成了极大的健康隐患。自然界中，沙门氏菌无处不在。沙门氏菌可通过自身的Ⅲ型分泌系统(如t3ss-1、t3ss-2等)将毒力基因(毒力岛1、毒力岛2)编码的一系列毒力因子运输感宿主细胞的表面^[1-3]。一方面，毒力因子(如效应蛋白)可改变宿主细胞中的信号通路，促进细菌入侵宿主，使其在宿主细胞中大量复制和存活。另一方面，毒力因子(如调节蛋白)调节蛋白可影响宿主的抵抗力和遗传学特性。研究表明沙门氏菌生物菌膜(salmonella spp., listeria monocytogenes, yersinia enterocolitica, campylobacte jejuni, staphylococcusspp., escherichia colio157:h7)可引起严重的食物中毒^[4-5]。在我国，由沙门氏菌引起的食物中毒占细菌性食物中毒的70%~80%^[6]。

食品受食源性致病菌污染的途径很多，中国食源性疾病监测网的调查结果显示，27%的污染来自于食品加工设备等造成的交叉污染，是最主要的污染途径^[7]。已有研究表明食源性致病菌可粘附、生长于食品及加工器械表面，在菌体－菌体和菌体－接触面的相互作用下，通过菌体增殖、分泌胞外基质形成细菌聚集体，该聚集体被称为生物菌膜(biofilm, bf)^[8]。生物菌膜的形成是一定条件下一些微生物的特定的生长状态。形成菌膜后，菌体表现出一些不同于游离状态的生理特点，对不良环境的抗性增强，在工业、食品领域都产生严重影响。

2. 研究的基本内容和问题

1研究目标

鉴定沙门氏菌生物菌膜形成过程中特征性srnas数量以及种类。

2研究内容

3. 研究的方法与方案

1 研究方法

（1）以肠炎沙门氏菌为研究对象（菌株分离源为肉品器械表面），以食品级304不锈钢材质为接触面，以肉汁液（mtlb）和标准培养液（tsb）为生长基质（模拟肉品加工与实验室培养），20℃培养三天得到生物菌膜和浮游菌体，再进行特征性srnas的识别。

（2）筛选出特征性srnas，然后运用多重序列比对技术来分析目标srnas在肠杆菌科中（选取多种细菌的全基因组序列进行比对）的保守性，最后利用rt-qpcr技术结合2^-△△ct法，分析特征性srnas对沙门氏菌生物菌膜形成过程中的调控作用。

4. 研究创新点

（1）研究思路与内容创新

首次揭示肠炎沙门氏菌在不锈钢表面形成生物菌膜过程中特征性srnas的类别。

（2）研究技术与方法新颖

5. 研究计划与进展

1 研究计划

2016.11-2016.12 文献阅读和综述

2016.12-2017.2 方案设计